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荧光原位杂交(染色体荧光原位杂交)

来源: 长治医学院附属和平医院生殖中心 类型: 染色体检查 时间: 2021-07-21 09:54

多元荧光染色体原位杂交等,染色体荧光原位杂交技术;;;;;;;;;;;荧光标记染色体原位杂交技术提供了一种快速有效的方法将DNA片段与真核细胞的特定染色体连接起来,并对这些DNA片段进行分类。这是研究DNA序列在染色体上位置的最直接的方法。同位素原位杂交技术最早是在Gall和Pardue1969年工作的基础上,在20世纪70年代建立起来的,但当时仅用于定位多线染色体上的DNA序列或定位中期染色体上的重复序列。

外周血样本的处理:

1、将样本片浸泡于70%、85%和100%的乙醇中各一分钟以便充分地脱水。将片子风干后就可以进行重复的杂交了。二次杂交中建议将变性的时间缩短一半,但不得少于3分钟。如果对同一样本还要进行三次杂交,变性的时间就无需减少了。对于多次杂交,复染液浓度的降低有利于保持探针的亮度。

2、曾有报道在同一样本片上进行了多达8次的FISH操作。也可对已经进行G带显色的样本片进行FISH操作:将样本片浸泡于70%、85%和100%的乙醇中各二分钟以便充分地脱水。将片子风干后就可以进行重复的杂交了。

3、二次杂交中建议将变性的时间缩短一半,但不得少于3分钟。如果对同一样本还要进行三次杂交,变性的时间就无需减少了。

4、7FISH技术有哪些主要优势?

5、可用于中期染色体及间期细胞的分析;

6、可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。

荧光原位杂交(染色体荧光原位杂交)

染色体荧光原位杂交技术的原理及其应用

荧光原位杂交技术是现代分子生物学和基因工程中广泛应用的一项新技术。它可以识别核酸分子之间的同源性。雌雄异株,是一种多年生攀缘落叶藤本果树。它是20世纪人工驯化和栽培的4种最成功的野生果树之一。

猕猴桃属植物种类繁多,分布范围广,生态习性不同。它包含了大量的野生资源和相关物种。它有一个相对复杂的遗传多样性。由于自然杂交、选种、杂交育种等因素,种内和种内基因的种间渐渗现象频繁发生,从而形成极为丰富的种间和种内变异。

因此,研究猕猴桃植物的遗传多样性,深入研究种间和种内的亲缘关系具有明显的重要性和必要性。目前,国内外学者利用形态学、孢粉学、细胞学、生物化学、分子生物学等技术,从不同层次、不同方面、不同角度对猕猴桃及其野生近缘物种进行了大量的遗传多样性研究。

荧光原位杂交(染色体荧光原位杂交)

染色体荧光原位杂交的技术.

染色体荧光原位杂交技术;;;;;;;;;;;荧光标记的染色体原位杂交技术提供了一种快速而有效的手段,将DNA片段和特定的真核生物细胞的染色体区带联系了起来,并将这些DNA片段排序,这是研究DNA顺序在染色体上位置的最直接的方法。最早,人们根据Gall和Pardue在1969年的工作,于70年代,建立起了同位素原位杂交技术,但当时只是用于DNA顺序在多线染色体上的定位或是重复顺序在中期染色体上的定位。1981,Gerhard和Harper等首先证明有可能将从个体基因中得到的单拷贝顺序(SCP,singlecopyprobe)通过同位素原位杂交技术定位到中期染色体上。在此基础上,80年代初起,荧光标记的原位杂交技术开始起步并得到运用且不断地发展起来。

;1、FISH技术简介;1.1探针的准备;(2)间接标记法:常用的间接法是将一些类似于半抗原(hapten)的标记分子掺入探针分子中。用的较多的试剂有生物素,地谷新(digoxigenin),二硝基苯(dinitrophenyl,DNP),氨基乙酰茐(aminoacetylfuorene,AAF),汞和磺酸盐(sulfonate)。就掺入方式来说,生物素,地谷新等是以核苷酸衍生物的形式掺入的,可用切口平移法来进行。现在更多的人开始用随机引物法。用这两种方法标记好的探针大小在200一500bp范围内,是用于杂交的最佳大小。另外,也可以在已知顺序的两个引物之间用PCR法来扩增,或从合适的载体上通过RNA转录而来。;1.2探针和染色体的杂交;1.3信号的检测;1.4分带和信号定位;由于杂交和分带同时进行效果不佳,有人采用FL(fractionallength)来测量。以杂交信号相对于某固定位置(如端粒)的长度占该染色体长度的比例来表示。

荧光原位杂交(染色体荧光原位杂交)

荧光染色体原位杂交检查是什么意思

(1)应用程序1。(基于扩增、基因缺失、基因断裂、基因融合等检测。样品预处理:可选用自动处理的设备或样品脱模剂进行人工处理3。(变性杂交:将带目标探针的样品置于杂交仪中进行杂交(85℃变性5分钟,42℃杂交2小时)。洗涤:2XSSC室温1分钟,68°CFastProbe®洗涤液2分钟;37°C纯水1分钟;干了。

5.抑制:根据不同的要求选择合适的染料溶液。

6.根据不同的要求选择合适的染料溶液。

7.(初步的固定对FISH的结果有很大的影响,不充分的固定会导致信号丢失。如果固定时间过长,则难以消化高背景。

8.(手术组织切片、穿刺组织切片、肿瘤细胞块)用4%中性甲醛固定6-72h切片厚度:2-4um,载玻片:粘连载玻片9。组织样本预处理各步骤的原则及注意事项:酶消化:消化组织上的蛋白质并进行杂交,减少背景

荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)是利用非放射性荧光材料,通过核酸探针杂交原理显示核酸序列在细胞核或染色体上的位置的一种方法。这项技术出现于20世纪70年代中期,对染色体异常的研究越来越多。近年来,随着FISH探针种类的不断增加,该技术逐渐被应用到各个领域。

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