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染色体的端粒部分为(染色体的端粒区为)

来源: 解放军总医院第六医学中心 类型: 人的染色体 时间: 2021-06-05 11:53

在染色体末端能合成端粒的DNA,1.美国广播公司(ABC)2。公元前3。CDE4。CD5。公元前6。ABD7。BCD8。ABCD9。ACDE10。B(3)术语的简要解释(4)问题和答案染色体多态性是在正常人群中可以看到的各种染色体的恒定和微小的变异。明显的差异的主要表现形态结构、带宽和着色强度的一对同源染色体,例如,Y染色体的长度变化,近端着丝粒染色体的短臂上的增长或缩短卫星的茎的次生缢痕,卫星的存在与否、大小和复制情况。第一个

1、第九章人类染色体一、教学大纲要求掌握人类染色体的结构形态、类型和数目;掌握人类非显带核型和G显带核型分析及描述方法;掌握染色体多态性概念及其在医学研究中的应用;熟悉细胞分裂过程中染色体的传递;熟悉性染色质和莱昂假说;了解人类细胞遗传学研究方法和进展。

2、B.从一次细胞分裂开始,到下一次细胞分裂结束为止所经历的全过程C.从一次细胞分裂结束开始,到下一次细胞分裂开始时为止所经历的全过程D.从一次细胞分裂开始,到下一次细胞分裂开始为止所经历的全过程E.从一次细胞分裂开始,到细胞分裂结束为止所经历的全过程减数分裂和有丝分裂的相同点是A.细胞中染色体数目都不变B.都有同源染色体的分离C.都有DNA复制D.都有同源染色体的联会E.都有同源染色体之间的交叉生殖细胞发生过程中单分体出现在A.减数分裂前期ⅡB.减数分裂中期ⅡC.减数分裂后期ⅠD.数分裂后期ⅡE.减数分裂末期Ⅰ生殖细胞发生过程中四分体出现在减数分裂前期Ⅰ的A.细线期B.偶线期C.粗线期D.双线期E.终变期同源染色体的联会发生在减数分裂前期Ⅰ的A.细线期B.偶线期C.粗线期D.双线期E.终变期按照ISCN的标准系统,1号染色体,短臂,3区,1带第3亚带应表示为A.1p31.3B.1q31.3C.1p3.13D.1q3.13E.1p313DNA的复制发生在细胞周期的A.分裂前期B.分裂中期C.分裂后期D.分裂末期E.间期某种生物的染色体数目为2n=6条,如果不考虑交换,它可能形成的正常生殖细胞类型是A.2种B.4种C.6种D.8种E.10种仅在某些细胞类型或特殊的发育阶段呈现凝缩状态的染色质称为A.结构异染色质B.兼性异染色质C.常染色质D.X染色质E.Y染色质人类染色体数目2n=46条,如果不考虑交换,则人类可形成的正常生殖细胞的类型有A.246B.223C.232D.462E.234在核型中的每对染色体,其中一条来自父方的精子,一条来自母方的卵子,在形态结构上基本相同,称为A.染色单体B.染色体C.姐妹染色单体D.非姐妹染色单体E.同源染色体染色体的端粒区为A.染色质B.染色体C.结构异染色质D.兼性异染色质E.以上都不是减数分裂过程中非姐妹染色单体之间的交换发生在A.前期ⅠB.中期ⅠC.后期ⅠD.中期ⅡE.后期Ⅱ生殖细胞发生过程中四分体出现于前期Ⅰ的A.细线期B.偶线期C.粗线期D.双线期E.终变期(二)X型选择题染色体C显带可使以下部位深染A.着丝粒B.次溢痕C.长臂D.Y染色体长臂远端E.短臂染色体多态性部位常见于A.X染色体长臂B.Y染色体长臂C.16号染色体次溢痕D.端粒E.随体及随体柄部次溢痕区下列人类细胞中哪些具有23条染色体A.精原细胞B.卵原细胞C.次级卵母细胞

染色体的端粒部分为(染色体的端粒区为)

什么是染色体的端粒

1.端粒线状染色体的两端有一种特殊的结构,叫做端粒酶(端粒酶),它由许多短的重复序列组成(图)。这个重复序列通常富含G(G)-rich),其互补链富含C(C-rich)。例如原生动物四膜虫的重复单位为TTGGGG(onechain的序列);人端粒序列为TTAGGG。TG链比AC链长,形成3'单链端。端粒的功能有稳定染色体末端结构、防止染色体末端粘附、防止染色体被核酸酶降解、确定正常有丝分裂的次数等。原核生物的染色体是圆形的是的,所以没有末端问题,所以没有端粒结构。随着每次有丝分裂,端粒DNA会逐渐缩短(如下图2所示)。端粒重复序列可以作为缓冲物来保护条带。含有遗传信息的内部序列。当端粒DNA收缩到一定程度时,其结果是编码区基因被破坏,染色体融合或染色体降解,细胞死亡

以遗传标记R1427/R2231(122.9—123.8cM)和R2184S(129.6cM)所分别锚标的重叠群(ct9842和ct9816)为起点,采用基于STS的作图策略(STS.contentmapping)进行重叠群延伸,最终构建了覆盖水稻基因组第4号染色体长臂近端粒区约7.3cM(122.3—129.6cM)的一个连续的1.8Mb的可测序BAC克隆重叠群。胲重叠群包含BAC克隆74个,其余来自BAC克隆的末端序列),平均每30Kb分布一个。通过遗传图和物理图的比较发现,该区段单位遗传距离所对应的物理距离为80一160Kb,略低于水稻基因组平均的270Kb/cM05双重叠群中可挑选出重叠最少的22个BAC克隆进行序列测定。f其中的10个BAC克隆已完成测序(全长1060Kb,重叠部分130Kb),其余12个BAC克隆的随机测序已完成,正在对余下的39个缺口进行填补。22个BAC克隆序列总长2383Kb,重叠部分总长548Kb(23%),则所获得的重叠群的实际长度为1835Kb。?。对930Kb完成序列进行了注解。结合软件预测和数据库检索的信息,在930Kb序列中预测了153个蛋白编码基因,平均的基因密度为6.1Kb/gene。卢庄所预测的基因中有56.2%的基因有ESTs佐证,68.6%的基因在数据库中能检索到相似的序列,50%的基因功能未知,19个基因以基因簇的形式存在。通过对重复序列数据库的检索,在该930Kb序列中检测到若干重复序列元件,包括6个逆转座子,6个转座子,以及各种类型的MITEs一共95个等0MITEs如此广泛、高密度的分布暗示了其在基因组中发挥着很重要的作用。结果表明:该过氧化物酶基因簇由5个第三类过氧化物酶基因所组成(ospl.5),编码两个阳离子过氧化物酶和三个阴离子过氧化物酶;该5个过氧化物酶基因与来自玉米和大麦的过氧化物酶基因(apl,prx7)共同形成了第三类过氧化物酶基因家族中一个新的分枝。卜]关键词:重叠群延伸,可测序重叠群,过氧化物酶基因簇生重型生型!鲎丝丝丝堂鲤壅塑塾£生丝丝塞煎茎AbstractChenZeHua(BiochemistryandMolecularBiology)DirectedProfessorHongGuoFanProgresscompletechromosomesequencingofricegenomereliesonconstructionofhigh.qualitybacterialclonemaDsspanninglargechromosomalregions.Toachievethisgoal,wehavecombinedthemethodsofSTS—contentanalysis,restrictiondigestfingerprintingandSouthernhybridizationbuildingCOntigs.StartingR2184S)andct9842(anchoredR1427,R2231),a1.8Mbcontiguoussequence.readymapCOYering7.3cM(122.3-129.6cM、WaSconstructedintheregionclosetodistaltelomereofricechromosome4.Theconfigcontainsatotaiof74BACs.providingaveragecoverageof4.5.65STSsweremarkedontheCOntig.providingaveragemarkerresolutionof30Kb.AminimumtilingpathWaSsubsequentlydefmedthatconsistsof22BACs.whicharebeingusedtosequenceregionofricechromosome4.22tilingBACsofthe1.8Mbcontigwerechosentosequence.10ofwhichhavebeensequencedcompletely.resulting1060KbfiIlishedsequences.Shotgunsequencingoftheother12BACshasbeencompleted,gap—fillingbyprimerwlkingoftheremaining38gapsunderway.ThesequencecontigsineachBACwereorderedsubclonescallfoldanalysis.Sequenceannotationwascarriedoutforthefmished930Kbsequences.153protein—codinggeneswerepredictedbyacombinationofsoftwarepredictiondatabasesearching.ESTsmatchedto56.2%ofthe153predictedgenes.68.6%genessharesimilanty晰t11Genbankentries,abouthalfofthegenes’functioncarl、beindicated.Mobilerepetitiveelementshavebeenidentifiedinthe930KbsequencebysearchingrepetitiveDNAdatabase,includingretrotransposons.6transposonsand95MITEs.Structuralandevolutionaryanalysisofaperoxidasegeneclusterinthe930Kb.revealthat:theclusterconsistsof5classIIIperoxidasegenes.3ofwhichencodinganionicperoxidase,theother2encodingcationicperoxidase;togetherprx7.ospl.5constituteanewhranchoftheclassIIlperoxidasefamily.KeyWords:contigextending,sequence—readycontigmap,peroxidasegenecluster11一、引言第一部分:水稻第4号染色体长臂近端粒区可测序框架图的构建基因组测序是基因组研究中非常基础而且重要的一步,对全基因组进行高效而准确的测定将会对随后的功能基因组研究或其他的基因组相关研究起着非常关键的作用【1,2’31。从基因组整体水平来讲,测序战略可分为全基因组随机测序(whole.genomerandomsequencing)和基于物理图的测序(map.basedsequencing)[4,5,“。大量的基因组测序实践表明,全基因组随机测序战略对于小于10Mb的基因组是非常高效的,而且最终能获得高质量的序列17,8…。而对于较大的基因组多采用基于物理图的测序战略进行【lq11121,该战略要求首先构建物理图,然后在物理图的基础上进行测序。在基因组研究的早期,基因组物理图的构建通常是首先构建一个大尺度的、低分辨的框架图(如YAC物理图),然后在此基础上进一步转化成高分辨的物理图(如cosmid物理图等)”3,”J。随着基因组研究的发展,以及新的克隆系统(如BAC、PAC等1的引入Il5’16】,基因组物理图的构建得到大大的简化,物理图构建的效率得到提高。在一个具有较高密度的分子标记的遗传图基础上,现在研究者可利用BAC系统或PAC系统直接构建全基因组的高分辨的物理图Il‘7,1819],而且所构建的物理图为可测序物理图(sequence.readymap),可直接用于基因组测序。所谓的可测序物理图须满足:构成物理图的基本元件可直接用于随机测序,如BAC、PAC等;能够提供足够的信息,以便从物理图中挑选出重叠最小的克隆进行测序120,212223】。可测序物理图的构建对于大基因组测序变的越来越重要,而且物理图构建和大规模测序可有机结合、同时展开,加快了基因组测序的步伐。拟南芥菜是第一个全序列被测定的模式植物基因组f24,2526272引。水稻是继拟南芥菜之后又一个拟定进行全基因组测序的模式植物基因组129一ol。中国的水稻基因组项目发起于1992年,现已成为国际水稻基因组研究的重要成员。在完成水稻基因组的初步的物理图之后【31】,我们开始转入对第4号染色体物理图的精细化和大规模测序132】。构建覆盖第4号染色体全长的可测序物理图成了首要的工作。充分利用已有的资源,完成了水稻第4号染色体长臂近端粒区1.8Mb的连续的可测序物理图,为该区段的全序列测定打下了坚实的基础。构建可测序物理图强烈依赖于标有高密度分子标记的遗传图和高质量的BAC库。本实验室曾先后构建了两套水稻基因组的BAC全库【331,约覆盖基因组10倍,克隆平均插入110Kb。从该图上发现在第4号染色体长臂近端粒区一共标有11个RFLP标记,其中在网上能检索到序列的只有9个。该9个标记覆盖6.3cM,实际上分成两簇,123.3.124.2cM和128.6.129.6cM,两簇标记之间相距4.7eM(Fig.1)。在最近更新的遗传图上在该区域又增加了4个标记【351,分别为S12653S(120.3eM)、E470S(122。3eM)、E3142S(129.6cM)和C11468S(129.6cM)(Table2)。除此外还参照了Comell大学所构建的水稻基因组遗传图【36,371一粼粼Fig.1Ricelinkagemapintheregionclosetotelomereofchromosome4.11RFLPmarkerswerelocatedintheregionfrom123.3cMto129.6cMI”J.二、实验材料与实验方法(一)实验材料1、菌种、质粒:菌种:大肠杆菌(EscherichiacolODH5d、DHl0B质粒:pBluescriptKS+(pKS)、2、酶类:HindIII、BarnHI、EcoRI、NotI、T4DNA连接酶、T4DNA聚合酶、RNaseA、Agarase、MungBeanNucleaseI、CIAP(牛小肠碱性磷酸酶)等(BoehringerMannheim)。3、试剂盒类PCR试剂盒(Takara);RapidLigationkit(BoehringerMannhei心RandomPrimerLabelingkit(Amersharn)OL.”P.dCTP,rediprimeII同位素随机标记试剂盒(Amersham)ABIPrismReadyCycleSequencingkits(BigDyeterminator)(PE)ET—terminator测序试剂盒(Amersham)4、化学试剂:Tryptone、YeastExtmct(Oxoid);Agarose(Sigma);Lowmeltingpointagarose(FMC);PEG8000(Merck);p巯基乙醇(Fluka);Acrylamide、bis—Acrylamide(Sigma);TEMED(Sigma);氨苄青霉索(Amp);氯霉素(Chl)Tfis(BoehringerMannheim);尿素(GibcoBRL);DextranSulphate(amersham)5、主要仪器:PE公司PE9600,PE9700和ABl377自动测序仪PTC-100、PTC-200PCR仪(MJResearch,Inc.1紫外检测系统IS.1000;Bio.RadGeneLinkerxMUVChamberBio-Rad公司脉冲电场凝胶电泳系统;真空冷冻抽干系统Millipore公司Milli-Q超纯水制备系统Sonicator(BANDELINsonopulsGM20Bio.Rad槽式电泳系统杂交炉及分子生物学实验室其他各种常用仪器Bechman公司的CS一16台式离心机,AvantiJ-25高速离心机MJ公司的PTC一200和PTC一225PCR仪Heraeus公司的line烘箱,pico和fresco离心机和cabofuge400R平板离心机SORVALL公司的RT7平板离心机SUN,SPARC,ULTRAl0,SGIex2工作站6、常用培养基及其配制:LB:tryptone109Yeastextract59NaCl109用10NNaOH调pH至7.0蒸馏水补至1L分装后经高压灭菌(1.034105Pa,20min)后使用。TB:Trypton129Yeastextract59Glycerol4ml加水调至900ml,于1.034x105Pa高压蒸气灭菌20min,再降温至60。C以下.加入100ml灭菌的磷酸缓冲液(含2.319KH2P04,12.549K/HP04)7、1r1005F8sD6f1005F'8sD6ra6{3plfa68P1rq68sp6fq68sp6]cL1386plfL1336plrL1336sP6fL1336sD6r18298t7f18298t7ragaattaaaCaCattaagagttcgtgatcgatcagagatatgtccttcatgcttgataaCtatcttaaaagtagatc(7attatatataaaagctgtatttttttgagccttgtatt七aCCgaatacatctcgaaCCaatcggatcattttaagCaatggcattgl:atatgacagatt(二:)实验方法1、BACDNA的小量制备SolutionI:50raM葡萄糖SolutionII:(现配现用)SolutionIII:(pH4.8)gtcttgCaagaacggtagtgtcatgctatctaccqcattatctataggatcaaCcatgtaggagcttcttgttaggttgatgaaCaCggtaaCctgetggcaattatccgtcgcagttcgcgagattacC.CgttatcagaggtgttgctcgetagtattgcctagcagtacCCaggt25mMTris-HCL(pH8.0110mMEDTA(pH8.0、0.2MNaOH1%SDS5MKac60ml冰乙酸28.5ml11.5mlttcCaaga.ctggaggtcacttcatttgaCatcggtcctacagcgctactatttgaattcatgaCaCtca.aCataagcacgtatcctttcatCCaCCCaCgag七cqaCCCCaaCCttccacgCaCaCCCCatacgtggcgaaCCCCgggtCcttatCctgctcgatcaaaatCCctcgtt460bp410bp280bp290bp470bp360bp540bp360hip280bp320bp390bp440bp250bp360bp410bpNH40Ac:7.5M从固体培养基中接种一生长良好的单菌落至4ml含氯霉素(12.5mg/1)的LB液体培养基中,370c振荡培养约16小时。(I)、将3ml培养液分两次于室温离一1)(12000rpm、2min):P1.5mleppendorf管中,弃尽上清;(2)、加入120一SolutionI,充分振荡混匀;(3)、加240一SolutionII,颠倒混匀,放冰上5min;(4)、加180“SolutionIII,反复颠倒混匀,放冰上5min;(5)、12000rpm,40C离心10min,取上清约500一;(6)、加入7.5MNH40Ac500一,颠倒混匀,放冰上20min;(7)、12000rpm,40C离心15rain,取上清近lml;(8)、加入0.6体积的异丙醇,颠倒混匀,室温放5—10min;(9)、12000rpm,室温离心10min,去尽上清,70%酒精洗涤,干燥后溶于30dsddH20中。2、BACDNA的末端测序(1)、准备反应体系:小量制备的BACDNA:6—10d5CSAbuffer:2dprimer(T7或SP6):10—50pmolBigdyeterminatormix:4dsddH20:补至20“(21、反应循环960C2min196。C30sec循环30.40次l520C10sec160。C4mindoCforever(3)、后处理加入25一乙醇/NaOAc(pH5.2)混合液(20:1),振荡混匀,室温放10—20min,12000rpm离心15—20min(如果是平板离心机,则4000rpm离心15—20rain),去尽上清,70%酒精洗涤,室温晾干后,放一20。C,待用于上样。(4)、测序产物上样及数据收集聚丙烯酰胺凝胶的配制:本实验室测序所用聚丙烯酰胺凝胶的浓度为4.5%(29:1),通常直接大量配制4.5%的胶,储存于4。C。使用前取出一定体积的4.5%胶,按每30ml胶加人150“10%APS和18一TEMED,混匀后即迅速灌胶。灌好的胶于室温凝2小时以上便可用于上样。测序产物上样及数据收集参照PE公司操作手册。3、根据末端序歹q设计引物,或者根据遗传标记设计弓I物,并用于STS的筛选把所获得的BAC末端序列进行数据库检索,以大致检验是否含有重复序列。如果没有明显的重复序列,就可以进行引物设计,通常设计的引物长度在18—20bp。以特定的BACDNA或基因组总DNA为模板进行PCR扩增便可获得所需的STS探针,扩增片段长度一般在250—500bp。PCR反应体系为:模板DNA:小量制备的BACDNA0.1d(约50ng)(如果是基因组DNA则需100-200ng)引物:10.20pmol10PCRbuffer(Mf+free):5ddNTPmix:4dMgCl2(25mM):4sddH/O:补至50d循环程序为:95。C4minf95。C30sec循环30次1550C15see172。clmin40Cforever反应完毕,各取5“电泳检测(1%agarose,1TAE,2-5V/cm)。4、用多个STSs进行水稻BAC全库的扫描,获得相应的阳性BACs(1)、水稻BAC库高密度杂交膜的制备在实验中所使用的杂交膜均为AmershanHybondN+Membrane。将此膜剪裁成128cm大小,经标号后夹于3MM滤纸中,一起放入72孑LEppendorf盒中,然后于1210C灭菌20min,再经烘干后密封保存于40C待用。实验中所用到的试剂如下:LB固体培养基,20SSC,10%SDS,5MNaCl,0.5MEDTA(pH8.O),1MTris.C1(pH8.O),10%Sarcosine.Na。BAC高密度杂交膜的制备具体过程如下:点膜及培养将融化好的含氯霉素12.5mg/1的LB倒入水平放置的96孔板板盖,每盖大约50ml。待培养基完全凝固并稍微吹干后,将裁剪好的并经灭菌处理的膜平整地铺于其上。应尽量避免膜与培养基之间产生气泡。然后就可以开始点膜。点膜用BeckmanBiomek2000AutomaticLaboratoryWorkstation进行,按55点阵方式自动点样。所点的BAC库包括:BACHind和BACBam。点好的膜于370c无菌隔离条件下静置培养10。18小时,待膜上的菌落长到合适时便可进行后续处理。膜的固定与保存将3MM滤纸裁成合适大小,铺两张于72孔Eppendorf盒的盖内,用2SSC,5%SDS将其浸润,将膜置于滤纸上,长菌的一面朝上,静放2min,切勿让液体直接浸泡膜的正面。将膜连同盒盖一起放入微波炉,以最大功率(625w)烤2.5min,直至膜完全烤干。随后取96孔板盖,倒入25ml蛋白酶K溶液(50mMTris.Cl(pH8.o),50mMEDTA(pH8.o),100raMNaCl,10%Sarcosine-Na,25009/ml蛋白酶K),将烘干的膜浸泡于该溶液中,于370C温育30.45min,然后将膜取出,平置于滤纸上,自然晾干。再经紫外交联处理(200mJ)将DNA固定于膜上。将做好的膜夹于3MM滤纸中,真空抽干后装入塑料保鲜袋保存于干燥的环境中。(2)、探针的标记与杂交探针的标记与杂交及结果检测按ECLkit(Randomprimelabclingdetectionsystems,versionII)操作手册进行。通常用于标记的DNA约50rig,杂交于600c进行16.24小时。显影完毕,从胶片上读出阳性的BAC克隆号(需扣除自身阳性的BAC克隆),并从BAC库中接种相应的菌种,小量制备DNA用于随后的进一步筛选确证。5、对所获得的阳性BACs进行PCR筛选,以确定单个STS所对应的阳性BACs(1)、混合引物筛选以筛选BAC库时所用探针对应的引物为混合引物,对新鉴定出的潜在的阳性BAC克隆分别进行PCR扩增,同时以自身阳性的BAC克隆为对照,通过比较阳性条带的大小可初步确定单个的探针所对应的阳性BAC克隆。所用的引物浓度为每一个引物10-20pmol,于50一的反应体系中进行扩增,扩增的其他条件同常规PCR。扩增完毕,电泳检测,根据扩增条带的位置进行初步判(2)、单对引物筛选经过初步的筛选后,再以单对的引物对相应的BAC克隆进行扩增,以获得进一步的确证。扩增条件仍然同前。对扩增产物进行电泳检测便可明确判定所挑选的BAC克隆是否为真正的阳性克隆。6、BACDNA的指纹分析,以及S01athem杂交分析在确定了单个的探针所对应的阳性BAC克隆后,便可对新获得的阳性克隆及原有的重叠群末端的克隆进行指纹比较分析,可进一步确证阳性的BAC克隆,同时还可获知阳性BAC克隆的延伸情况。(1)、则用HindIII+BamHI同时酶切。(2)、酶切反应在370c进行2—3小时后,取酶切产物进行电泳(O.8%agarose,2.5v/cm,1XTAE)。电泳完后进行EB染色,拍照。(3)、Southern转移及杂交如指纹比较分析的结果比较明确则不必再进行Southern分析。如指纹比较分析的结果比较难判断则须进行Southern分析,以进一步确证阳性,同时获知重叠群的延伸情况。Southern转移基本上按“分子克隆”进行。转好的膜经紫外交联以后即可用于杂交。杂交所用的探针通常为BACDNA:有时选择原重叠群端上的BAC10为探针,有时选择新鉴定的阳性BAC中可能延伸最远的BAC为探针。探针的标记和杂交过程基本同于实验第一部分的方法四。三、实验结果与讨论(一)、初始重叠群的获得及鉴定在以往的工作中,本实验室构建了水稻的全基因组BAC库,并根据指纹、锚标的策略,利用遗传标记R2184S将重叠群ct9816定位到水稻第四号染色体长臂近端粒区【3“。结果表明,该重叠群实际包含BAC克隆5个:b1813l(H0814011),b9090(H0420F06),b6166(H0315810),t11681(H0522F05),q3037(H0207F01);该重叠群的实际长度大概在150Kb,重叠群内部各BAC问的关系如图4B。Fig.2Southernhybridizationanalysiscontigct9816.TheminipreparedBACDNAweredigestedseparatedthroughO.8%agarosegel(A),transferredtoHybondN+membraneandsubsequentlyhybridizedb18131(C)respectively.LanesI-7:b18131b9090,b6166,t11681,q4609,q4702,q3037.M:入/HindIII.V:pBelloBACII/HindIII.同时从数据库中获得遗传标记R1427和R2231的序列,根据所获得的序列设计引物,以基因组DNA为模板,扩增出的片段分别命名为R1427n和R2231n。经测序后比较发现,R1427n和R223In相对于R1427和R2231分别多了300bp和100bp的插入片段,该插入片段被认为是内含子。以R1427n和R223In为探针分别筛选水稻基因组BAC库BACHind,分别获得阳性克隆:b2746(H0204E10),t14485(H0701H01),y18517(H0818H01)和q9522(H0425806),t11156(H0517808),t13684(H0618E04),y4329(H0221A09),t14277(H0624F09)。通过对各阳性BAC克隆的HindIII酶切指纹比较,可推测BAC之间的重叠关系(Fig.4)。然后对所有的阳性BAC克隆进行末端测序,选取部分末端序列设计引物,通过PCR来确定重叠群中各BAC克隆的排列方向,同时还发现R1427n和R223In所对应的两组BAC克隆之间已经有重叠,由此便得到一个含两个遗传标记的重叠群(命名为ct9842),结果如图4A。Fig.3Identificationofct9842.TheminipreparaedBACDNAsweredigestedsubsequentlyhybridizedt13684(B.1anes1-5)andR1427n(B.1anes6-8)respectively.Lanes1-8:y4329,q5289,q9522,tl156,t13684,y18517,t14485,b2746M:入/HindIII.Fig.4Thestartingpointscontigextending.Thect9842consistsof8BACs,isabout170Kbinlength(A).Thect9816consistsof5BACs,isabout150Kb(B).至此,在水稻第4号染色体长臂近端粒区获得两个重叠群,长度分别为150Kb(ct9816)和170Kb(ct9842)(FigA,B)。下一轮的延伸便可以这两个重叠群的四个末端作为探针筛选BAC全库,以此作为延伸的起点。(二)、重叠群的延伸遗传标记R2184S和R2231之间相距约6cM,按每个cM相当于270Kb算的话,则ct9816和ct9842之间的物理距离在1000Kb以上,而所使用的BAC克隆的平均长度在100.120Kb,每一次延伸通常能延伸50.80Kb,因此,为了填掉ctgSl6和ct9842之间的缺El必然需要很多轮的延伸。这里以其中的一轮延伸作为示例,以展示延伸的大致过程和基本原理。l、原重叠群末端的确定及探针的获得完整的一轮延伸是从探针的选取和获得开始的。在延伸过程中探针通常来源于重叠群的末端。而为了获得探针需要对原重叠群最外端的BAC克隆进行定向,即确定向外的一个末端。B8l1810t6883B1020D11B703D5B701F5t13684B213E10B606F5B518A1Fig.5Diagramtoshowthecontigstobeextended.ContigAisderivedfromct9842andBfromct9816.在上一轮的延伸中,所得到的重叠群(ct9816和ct9842)情况如图5。将B518A1的末端序列与已初步测序的b18131的序列进行比较,便可确定B518A1的T7端为重叠群ct9816向外的一个末端。而另外三个BAC克隆(t6883,B811810,B213ElO)的方向则需通过PCR的方法来确定。根据三个BAC克隆的末端序列设计引物,分别对三个BAC克隆进行扩增,同时从重叠群中选取个别与末端BAC克隆相重叠的BAC克隆作为对照,由此便可确定出重叠群ct9816的另外一个末端为B213E10的T7端,而ct9842的两个末端为:t6883的T7端和B811810的T7端(Fig.6Fig.6ContigendsdeterminationPCR.ThePCRproductswereseparated1.O%agarosegel.M:100bpladder.Thesampleswereloadedasbelow:primerst6883plf/rt6883sp6ffrB8llBlot7firtemplatet6883B703D5t13684t6883B703D5t13684B8llBlOB1020DllB70lF5y18517b2746B822E9lanes101112primersB811810p2f/rB213ElOt7f/rB213E10p2ffrtemplateB8llBl0B1020D11B70lF5y18517b2746B822E9B213E10B606F5t19267x16132B213E10B606F5t19267x161322、BAC库的筛选重叠群的末端确定以后,便可用来进行BAC库的筛选。用B518A1T7筛选BACHind和BACBam得到潜在的阳性克隆有:52088,715H8,718H2,14b19609(H0905C01)。而t6883T7,B811810T7和B213E10T7筛选BACHind和BACBam得到潜在的阳性有:q1124,x2109,q7430,b16844,118754,B102C4,B209D6,B52286,B508C6,B822G11,w335,q1123,b7625,703E8。然后接种以上BAC克隆,小量制备BACDNA,待用于进一步的PCR鉴定。3、对阳性克隆的鉴定B518A1T7所对应的阳性克隆经过一次PCR便可确定b19609(H0905C1)为真正的阳性克隆(Fig,7)。而t6883T7,B811810T7和B213E10T7所分别对应的阳性克隆则需要进行两轮PCR才能确定。首先以混合引物(t6883T7f’t6883T7r,B811810T7f,BSlIBl0T7r,B213E10T7LB213EIOT70对所有潜在的阳性BAC克隆进行扩增,同时以t6883,B811810和B213E10作为对照,通过比较扩增产物的大小可对潜在的阳性克隆进行初步的分_-Jt(Fig.8)。接下来便以单对引物分别对相应的组进行扩增,这样便能确定出每个探针所对应的阳性克隆(Fig.9)。结果表明B213E10T7对应的阳性为b16844(H080lD08),t6883T7对应的阳性为w335(H0104D11)、q7430(H0403D02)和118754(H0821C10),B811810T7对应的阳性为ql123(H0112F07)、ql124(H0112F08)、x2109(H0122H09)和h7625(H0405D05)。Fig.7PCRtodeterminethepositiveBACsobtainedfromtheBAClibraryscreeningbyprobeB518AIt7.M:100bpladder.Lanes1-5:B518AI,52088,715H8,7181-12,b19609(primer:B518A1t7f/r).Fig.8PCRtogroupthepositiveBACsobtainedfromtheBAClibraryscreeningmixedprobes(t6883t7,B81IBlOt7,B213E10t7).M:100bpladder.Lanes1-17:BSllBl0,t6883,B213E10,B102C4,B209D6,B508C6,B52286,B822GI1,w335,ql123,ql124,x2109,q7430,b7625,703E8,

染色体的端粒部分为(染色体的端粒区为)

一个染色体有几个端粒

1.(1)A型选择题真核细胞的染色体主要由________组成。aDNA和RNAbDNA和组蛋白d.c.RNA和蛋白质核酸和蛋白质non-histonee.组蛋白和non-histones染色质和染色体________a两种不同形式的存在的同一物质的不同时期细胞的b两种不同形式的存在的不同物质在不同时期细胞的C。同一物质在细胞同一时期的不同表现d不同物质在细胞同一时期的不同表现e两种物质的组成和结构完全不同异染色质在间期的核心________a.染色质高度螺旋和转录活动b.染色质较低程度的螺旋和转录活动c.染色质高度螺旋和没有转录活动d.染色质螺旋度较低,没有转录活动。以上都不是。间期核的常染色质________a.染色质高度螺旋和转录活动b.染色质较低程度的螺旋和转录活动c.染色质高度螺旋和没有转录活动d.染色质螺旋度较低,没有转录活动。螺旋度低,很少有转录活性染色质。检测发现某一个体的细胞核中有2个X小体,说明该个体的一个体细胞中有________条X染色体

端粒酶以自身的RNA为模板,主要由特定的DNA序列和蛋白质组成。它的主要生物学功能是保证染色体末端的完全复制,保持染色体结构的稳定。当端粒酶存在时,端粒DNA可以在染色体末端合成,以保持端粒长度。端粒酶主要由三部分组成:端粒酶RNA、端粒酶相关蛋白和端粒酶逆转录酶。下图是细胞分裂过程中染色体结构随端粒酶和不带端粒酶的变化示意图。以下列表中哪些是不正确的

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