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染色体步移图解(染色体步移缺点)

来源: 乌克兰MC医院 Mother and child(2011年) 类型: 染色体检查 时间: 2021-06-02 09:29

只能采用染色体步移技术,从第一重组克隆插入物的一端分离出一个片段,作为探针从文库中筛选第二重组克隆。这个克隆的插入包含与探针和染色体其他序列重叠的序列。从插入的第二个重组克隆中,分离小的末端片段,选择第三个重组克隆。重复这种方式获得相邻的片段,相当于染色体上的一步,因此称为染色体行走。染色体行走技术(genomewalking)是一项重要的分子生物学研究技术,利用这项技术可以有效地获得与已知序列相邻的未知序列。

1、根据已知的基因或分子标记连续步移,获取人、动物和植物的重要调控基因,可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究;

2、步查获取新物种中基因的非保守区域,从而获得完整的基因序列;

3、鉴定T-DNA或转座子的插入位点,鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等;

4、用于染色体测序工作中的空隙填补,获得完整的基因组序列;

5、用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。

6、TaKaRa新产品之GenomeWalkingKit试剂盒是一种根据已知基因组DNA序列,高效获取侧翼未知序列的试剂盒。相对于其它传统方法,本试剂盒具有高效、简便、特异性高、灵敏度高、一次性获得的未知序列较长等特点。其主要原理是根据已知DNA序列,分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物(SPPrimer),与试剂盒中提供的四种经过独特设计的退火温度较低的兼并引物,即APAPAPAP4进行热不对称PCR反应。

7、通常情况下,其中至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称PCR反应,通过三次巢式PCR反应即可获取已知序列的侧翼序列。

染色体步移图解(染色体步移缺点)

染色体步移图解

1限制性内切酶切和连接的PCR这种方法首先剪切基因组DNA,然后让酶切产物自我循环或在酶切产物的末端添加相应的连接物。用已知序列上的特异性引物或适配器上的锚定引物扩增已知序列的上下游侧翼序列。逆PCR(inversPCR,IPCR)是Triglia等人提出的一种对已知序列的上游和下游未知序列进行扩增的方法。该方法的基本原理是对已知序列进行分析,选择已知序列之外的限制性载体PCR(singlespecificprimePCR,SSP-PCR)。SpBluescriptKS),这是一种PCR染色体行走技术,使用基于已知序列和载体上通用引物设计的特定引物来特异性扩增目的片段。图

2:载体PCR原理图Shyamala等利用该技术扩增了小鼠组氨酸转运操作子的侧翼序列

1、"Nature"杂志2006年九月版关注产品!科研人员已经发展了几种无需建立cDNA库或筛选克隆的PCR技术方法,用于获取与已知序列相连的未知序列。这些PCR方法包括反向PCR(IPCR),连接介导PCR(LM-PCR)和随机引物PCR(RP-PCR)。虽然这些方法有一定的效果并被不断改进,但是仍然受制于繁琐的酶切,适配体连接(adaptorligation)和纯化步骤。

2、RN,DrazenovichNL,FoleyJE.(2006)StructureoftheexpressionsiterevealsglobaldiversityinMSP2(P44)variantsinAnaplasmaphagocytophilum.Infect.Immun.746429-37.ChunhongYanandDouglasD.Boyd(2006)HistoneH3AcetylationandH3K4MethylationDefineDistinctChromatinRegionsPermissiveforTransgeneExpression.MolecularandCellularBiology266357-6371.AlhapelA,DarleyDJ,WagenerN,EckelE,ElsnerN,PierikAJ.(2006)MolecularandfunctionalanalysisofnicotinatecatabolisminEubacteriumbarkeri.ProcNatlAcadSciU.S.A.10312341-6..KnopfRRandTrebitshT.(2006)Thefemale-specificCs-ACS1Ggeneofcucumber.Acaseofgeneduplicationandrecombinationbetweenthenon-sex-specific1-aminocyclopropane-1-carboxylatesynthasegeneandabranched-chainaminoacidtransaminasegene.PlantCellPhysiol.471217-28..QizhenShi,DavidA.Wilcox,ScotA.Fahs,HartmutWeiler,CliveW.Wells,BrianC,Cooley,DrashtiDesai,PatriciaA.Morateck,JackGorski,andRobertR.Montgomery(2006)FactorVIIIectopicallytargetedtoplateletsistherapeuticinhemophiliaAwithhigh-titerinhibitoryantibodies.TheJournalofClinicelInvestigation116(7):1974-1982.QizhenShi,DavidA.Wilcox,ScotA.Fahs,HartmutWeiler,CliveW.Wells,BrianC.Cooley,DrashtiDesai,PatriciaA.Morateck,JackGorski,andRobertR.Montgomery(2006)FactorVIIIectopicallytargetedtoplateletsistherapeuticinhemophiliaAwithhigh-titerinhibitoryantibodies.J.Clin.Invest.1161974-1982.AhuAltinkut,OlgaRaskina,EviatarNevoandAlexanderBelyayev(2006)En/Spm-liketransposonsinPoaceaespecies:Transposasesequencevariabilityandchromosomaldistribution.Cellular&MolecularBiologyLettersIssue11214-229.AssafDistelfield,CristobalUauy,TzionFahima,andJorgeDubcovsky(2006)Physicalmapofthewheathigh-grainproteincontentgeneGpc-B1anddevelopmentofahigh-throughputmolecularmarker.NewPhytologist753-763.AndreyA.Perelygin,TeriL.Lear,AndreyA.ZharkikhandMargoA.Brinton(2006)ComparativeanalysisofvertebrateEIF2AK2(PKR)genesandassignmentoftheequinegenetoECA15q24-q25andthebovinegenetoBTA11q12-q15.Genet.Sel.Evol.551-563.Jung-WookKim,YasuoYamakoshi,TakanoriIwata,YuanYuanHu,HengminZhang,JanC.-C.Hu,JamesP.Simmer(2006)Porcinedentinmatrixproteingenestructure,cDNAsequence,andexpressioninteeth.EuropeanJournalOfOralSciences11433-41.ChengshuWangandRaymondJ.St.Leger(2006)AcollagenousprotectivecoatenablesMetarhiziumanisopliaetoevadeinsectimmuneresponses.PNAS6647-6652.EMIKOHAYAMA,SHIN-ICHIROIMAMURA,CUIJIAOWU,MAKOTONAKAZAWA,RUMIKOMATSUOKAandTOSHIONAKANISHI(2006)AnalysisofVoltage-GatedPotassiumChannel?

染色体步移图解(染色体步移缺点)

染色体又细又长

癌症是世界上最严重的健康问题之一,因为与某些疾病不同,它是一个不断演变的躲避和抵抗治疗的目标。在2020年12月23日在线发表的一篇论文中,来自加州大学圣地亚哥医学院和位于纽约和英国的圣地亚哥路德维希癌症研究所的一位同事描述了一种名为“chromocytosis”的现象,即染色体分裂。

,然后以一种最终促进癌细胞生长的方式重组。嗜铬蛋白是细胞历史上的灾难性突变事件。它涉及到基因组的大规模重排,而不是随着时间的推移逐渐获得重排和突变。

然而,基于pcr的染色体步行方法存在特异性和效率低、步行距离短、方法复杂等问题。Song博士解释说,尽管PCR通常需要两个起始位点,连接介导的PCR染色体行走只需要一个起始位点。通过连接到一个缺少5'端磷酸基的盒,第二个起始位点就产生了。这种方法的问题是,许多DNA片段通常是非特异性扩增。宋博士和他的同事开发的“模板阻断”方法减少了这种非特异性扩增。

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